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MKBio Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 堿性磷酸酶檢測試劑盒(顯色法)
目錄號 MP7501-100T 售價 562.00元
規格 100T 運輸溫度 冰袋運輸
其他名稱 Alkaline Phosphatase Activity Assay Kit 堿性磷酸酶活性檢測試劑盒 保存溫度 -20℃凍存
CAS號 N/A 有效期 1年
應用 ALP活性(定量) 訂購數量
產品簡介:

Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 堿性磷酸酶檢測試劑盒(顯色法)

 

產品標簽:

Phosphatase, Alkaline堿性磷酸酶;ALP/AKP;對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP);偶氮偶聯法;顯色法(定量);染色法(定性);


產品信息

產品名稱

產品編號           

規格           

價格(元)  

Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 

堿性磷酸酶檢測試劑盒(顯色法)

MP7501-100T

100T

562

【溫馨提示I】:堿性磷酸酶產品專題,了解更多相關產品資料;

【溫馨提示II】:見堿性磷酸酶染色試劑盒產品;

【溫馨提示III】:堿性磷酸酶活性檢測試劑盒產品專題;

【溫馨提示IV】:見堿性磷酸酶常用生化底物及試劑盒產品;


產品描述

堿性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP/AP/AKP/ALKP/ALPase,EC 3.1.3.1),堿性條件下能催化磷酸單酯水解,常見底物有對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP)、磷酸苯酯、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸等。常見ALP包括腸道堿性磷酸酶(如小牛腸來源,calf intestinal)、胎盤堿性磷酸酶(placental alkaline phosphatase)、非組織特異性堿性磷酸酶(tissue-nonspecific isozyme, alkaline phosphatase)等。

堿性磷酸酶(ALP)活性的變化與一系列生理和病理事件緊密關聯,比如骨骼發育、骨骼相關疾病、妊娠相關疾病和炎癥性腸?。╥nflammatory bowel diseases)等。正因如此,ALP被用作衡量生理特征或疾病的參照指標。另外,ALP活性檢測在環境監測、食品質量控制等方面也呈現重要作用。如,干細胞如誘導多潛能干細胞iPS,ALP活性很高,則ALP常被用作iPS誘導成功的標志;分化的結腸癌細胞內ALP活性顯著提高,則ALP常被當做結腸癌細胞分化程度的指標(定性/定量);血清中ALP水平提高,被稱作高堿性磷酸酶血癥,此癥狀被認為和惡性膽管阻塞、原發性膽管硬化、原發性硬化膽管炎、肝淋巴瘤和肝肉瘤等肝膽疾病密切相關;ALP是成骨細胞的副產物,血清中ALP活性升高和骨頭發育密切關聯;

本試劑盒能對細胞或組織裂解液或勻漿液、血清、血漿、尿液等樣品內源性堿性磷酸酶活性進行檢測。原理在于:對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP)是一種常用的堿性磷酸酶(ALP)顯色底物,堿性條件下能被ALP催化生成對硝基酚(para-nitrophenol,p-nitrophenol),呈黃色產物,可在400-415nm檢測到吸光度。產物黃色越深,代表ALP活性越高,反之則酶活性越低。則通過比色分析可定量檢測ALP水平。

本試劑盒可檢測100個樣品,包括標準品和空白對照。


產品組成

組分編號         

組分名稱                              

規格                

保存方式         

MP7501-A

pNPP顯色底物

2管

-20℃避光保存

MP7501-B

檢測緩沖液

15 mL

-20℃保存

MP7501-C

反應終止液

12 mL

-20℃保存

MP7501-D

對硝基苯酚標準品(10mM)

100μl 

-20℃避光保存


保存與運輸方法

保存:-20℃凍存,1年穩定。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1. 若希望進行酶活力的絕對定量,進行酶反應時必須注意精確計時。此時推薦孵育30min等較長時間,以減小操作過程中的時間誤差。若樣品中酶活性較高,則可預先適當稀釋樣品。

2. 樣品溶液中須避免出現EDTA、氟離子、檸檬酸鹽等堿性磷酸酶抑制劑。

3. 檢測緩沖液和對硝基苯酚標準品對人體有害,請注意適當防護。反應終止液有腐蝕性,請小心操作。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


操作步驟

1. 試劑準備:將所有試劑取出,恢復至室溫待用。

a) 顯色底物溶液:取一管顯色底物,溶解于2.5ml的檢測緩沖液中,充分溶解和混勻,冰上放置。新鮮配制的顯色底物溶液需在數小時(≤ 6h)內使用。

b) 標準品工作液:取10μl 對硝基苯酚標準品(10mM),用檢測緩沖液稀釋至200μl ,使得終濃度為0.5mM。


2. 樣品準備

a) 細胞或組織裂解液的準備:采用適當細胞或組織裂解液裂解細胞和組織,如有必要需進行適當勻漿,隨后離心取上清,用于ALP活性檢測?!咀⒁狻浚毫呀庖褐胁荒芎姿崦敢种苿?。樣品可-80℃凍存,避免反復凍融。

b) 血漿、血清和尿液的準備:血漿和血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,但為了消除樣品本身顏色的干擾,需設置加了血漿或血清但不加底物的對照?!咀⒁狻浚貉獫{制備不能用含EDTA和檸檬酸鹽的抗凝管。尿液通常也可直接用于測定。上述樣品可-80℃凍存,避免反復凍融。

c) 樣品的稀釋:若樣品中含有較高的ALP活性,可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋,也可以用試劑盒中的檢測緩沖液進行稀釋。若使用試劑盒內的檢測緩沖液進行稀釋,需注意保留足夠的緩沖液用于該試劑盒的檢測過程。


3.加樣

參考下表使用96孔板設置空白對照孔、標準品孔和樣品孔。標準品的用量分別為4、8、16、24、32和 40μl,樣品通??梢灾苯蛹?0μl。如果樣品中的ALP活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。

                      

空白對照(Blank)  

標準品(Standard)   

樣品(Sample)  

檢測緩沖液

50μl

(100-x)μl

(50-y) μl

顯色底物

50μl

50μl

樣品

yμl

標準品工作液

xμl


4. 混勻:用槍頭輕輕吹打混勻,也可借助搖床進行混勻。
5. 孵育:37℃孵育5-10min。(若待測樣品中ALP活性較低時,可適當延長孵育時間至30min)

6. 終止:每孔加入100μl反應終止液終止反應。此時,標準品或有ALP活性的孔會呈現不同深淺的黃色。

7. 檢測:405nm處測定吸光度。如果不能測定405nm,也可以在400-415nm范圍內檢測吸光度。如果不能立即測定,可以在數小時內完成測定,所顯現的黃色在數小時內穩定。

8. 單位定義:

堿性磷酸酶活性單位的定義:在pH9.8的二乙醇胺(DEA)緩沖液中,37℃條件下,每min水解pNPP顯色底物產生1μM對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的ALP量定義為一個酶活力單位,也被稱作一個DEA酶活力單位。在pH9.6的甘氨酸緩沖液中,25℃條件下,每min水解pNPP顯色底物產生1μM對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的ALP量定義為一個酶活力單位,也被稱作一個甘氨酸酶活力單位。一個甘氨酸酶活力單位約相當于3個DEA酶活力單位。本試劑盒測定的是DEA酶活力單位。

9. 結果分析:根據酶活性單位的定義,計算出樣品中的堿性磷酸酶活性。 



常見問題

1.   說明書提及配制好的顯色底物溶液需在6小時內使用完。試劑盒只提供了兩管顯色底物,是不是意味

著只能做兩次?

回答:是的。顯色底物以粉末形式提供,單次實驗需取一管全部配成顯色底物溶液,且需要在6小時內用完,不建議凍存后再使用。為了避免試劑盒浪費,請在累積足夠的樣本后再進行檢測。


2.   本試劑盒適用于細胞培養上清內堿性磷酸酶的檢測嗎?

回答:不可以。本試劑盒常用于細胞裂解液的檢測,不適合細胞培養上清的檢測,因為上清內的酶量偏低,不足以被本試劑盒檢測到,無法反映真實結果。


3.   本試劑盒內提及合適的細胞和組織裂解液,有沒有推薦的?

回答:推薦使用我司的免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)(Cat#: MP1508-100ML)?;蜃孕信渲坪?.2% Triton X-100的PBS,TBS或生理鹽水等適當溶液。裂解液內不能含任何磷酸酶抑制劑。


4.   本試劑盒內的堿性磷酸酶活性如何計算所得?

回答:根據標準曲線和待測樣品的吸光值,可計算到樣品中對硝基苯酚(p-Nitrophenol)生成量。再根據酶活性定義:將生成的對硝基苯酚摩爾量除以孵育時間,進行酶活計算。制作標準曲線時,可以將橫坐標體積轉換算成摩爾數,再繪制標準曲線,方便后續計算。根據標準曲線方程計算出生成的對硝基苯酚摩爾量除以37℃孵育的時間即得到酶活。


相關產品

貨號

名稱

規格

MP1508-100ML    

免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)

100ml          

MP7501-100T

堿性磷酸酶檢測試劑盒(顯色法)

100T

MP7504-100ML

堿性磷酸酶染色液(改良鈣鈷法)

2×50ml

MP7505-30ML

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)

3×10ml

 

文獻引用:

Wang CH et al. Colorimetric logic gate for alkaline phosphatase based on copper (II)-based metal-organic frameworks with peroxidase-like activity. Analytica Chimica Acta Volume 1004, 3 April 2018, Pages 74-81


Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit using p-nitrophenyl phosphate (pNPP) as aphosphatase substrate was purchased from MKbio Co. Ltd. (Shanghai, China).


 

K
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