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MKBio TRIzol Reagent 總RNA抽提試劑
目錄號 MF0403-100ML 售價 450.00元
規格 100ml 運輸溫度 冰袋
其他名稱 總RNA提取試劑 保存溫度 2-8℃保存
CAS號 N/A 有效期 至少一年
應用 總RNA提取 訂購數量
產品簡介:

TRIzol Reagent 總RNA抽提試劑


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產品關鍵詞:

TRIzol Reagent;酚氯仿抽提;RNase-free H2O; Total RNA 總RNA提??;RNAlater;Invitrogen 15596026;


產品信息

產品名稱

產品編號

規格            

價格(元)  

TRIzol Reagent 總RNA抽提試劑   

MF0403-100ML    

100ml

450


產品描述

TRIzol Reagent是一種即用型且操作迅捷的總RNA抽提試劑,適用樣本廣泛,包括人、動物、植物、酵母或細菌來源的細胞和組織樣本。TRIzol Reagent是一種含酚、異硫氰酸胍和其他專利成分的單相溶液,有利于抽提分子量大小不一的各種RNA類型。TRIzol Reagent能夠良好的維持RNA完整性,因能高效抑制樣本勻漿過程中細胞破損和細胞組分溶解時釋放的RNase活性。TRIzol Reagent能夠同時處理大量樣本,且以優化的方式一步法提取RNA,整個過程可在一小時內完成。


TRIzol Reagent分離的總RNA無蛋白質和DNA污染,適用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A)+篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆等下游實驗。


保存與運輸方法

保存:2-8℃保存,至少一年有效。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1)   所有離心管、槍頭以及相關溶液都必須無RNase污染。對于塑料制品、玻璃和金屬器皿、實驗儀器等可使用懋康生物的固相RNase清除劑去除RNase(貨號:MF0406-100ML),或者用含0.01% DEPC(貨號:MS5513-10ML)的去離子水浸泡過夜,之后高壓滅菌、烘干。對于實驗溶液可使用懋康生物的液相RNase清除劑(貨號:MF0407-1.5ML)來處理或用DEPC處理水(比如:MF0404-500ML)來配制。

2)   對新鮮組織或細胞樣本的抽提效果通常優于凍存的組織或細胞,由于組織或細胞凍融過程中可能存在一些RNase釋放出來并酶切樣品。若是不能及時抽提RNA,推薦先加入適量TRIzol Reagent,之后裂解樣品后再凍存。

3)   TRIzol Reagent含有毒物質,請在操作過程中注意好防護工作,戴好手套和護眼罩,避免皮膚接觸。在通風櫥內完成操作,避免呼吸道吸入。

4)  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

1.  需要自行準備的材料

水浴鍋或微量恒溫儀(Heat block)

異丙醇

75%乙醇

含0.5% SDS的RNase-free水或RNase-free水或DEPC處理水

【可選】RNase-free的糖原(核酸助沉劑)


2.  樣本要求

【重要】:樣本收集后立即進行RNA分離,或樣本收集后立即凍存樣本并保存在-80℃或液氮中直至RNA抽提。

樣本類型

每mlTRIzol Reagent處理的起始樣本量

組織(新鮮組織或保存在RNAlater等穩定液內的組織)

50~100mg組織

單層生長的細胞

1×105~1×107單細胞層(35mm培養皿,10cm2)

懸浮生長的細胞

5-10×106個細胞(動植物或酵母來源)或1×107個  

細胞(細菌來源)

 

3. 樣本準備與分相

3.1 根據起始材料用TRIzol Reagent裂解和勻漿樣本。

◇組織樣本

按比例每50~100mg 組織加1ml TRIzol Reagent,之后用合適的方法進行勻漿。通常用50~100mg組織即可獲得足量的RNA,滿足絕大多數下游實驗。加入過量組織或過少TRIzol都容易導致RNA提取失敗。

a)對于研缽研磨:將液氮凍存組織,放到研缽中研磨成粉末,之后加入1ml TRIzol,繼續研磨至組織完全裂解【研磨要迅速,最好不要超過1min】。b)對于玻璃勻漿器勻漿:加入1ml TRIzol上下手動勻漿組織10~15次。c)對于機械勻漿器:將組織放入塑料管內,將塑料管置于冰浴燒杯內,加入1ml TRIzol,將分散器頭垂直插入管內與組織直接接觸,設置轉速12,000~20,000 rpm,上下移動試管10~20次,直至組織完全打散,無明顯可見大塊即可。

◇單層生長的細胞

吸盡培養基,之后往35mm培養皿(10cm2)內加入1ml TRIzol Reagent,晃動3~5次,再用移液槍上下吹打3~5次,使其充分裂解?!景凑?0cm2培養面積加入1ml TRIzol加量。比如:六孔板每孔加入1ml TRIzol,12孔板每孔加0.5ml TRIzol】

◇  懸浮生長的細胞

離心收集細胞,吸盡上清,每5-10×106個細胞(動植物或酵母來源)或1×107個細胞(細菌來源)加入1ml TRIzol Reagent【加入TRIzol前不要清洗細胞,否則會增加mRNA降解的可能性】。用槍吹打幾次或適當渦旋,使其充分裂解。某些酵母和細菌如裂解不充分,可用勻漿器勻漿,使其完全裂解。

【注意】:樣本體積不要超過加入TRIzol體積的10%。

 

3.2 特殊樣本處理【可選】:對于某些富含蛋白,多糖或脂肪的樣本,經TRIzol Reagent裂解后可能會有不溶物或油脂狀漂浮物出現。此時需12,000g 4℃離心10min,之后吸取澄清的上清液至一新的離心管中。

3.3 室溫孵育5min,使得核蛋白體完全分解。

3.4 按照每1ml TRIzol Reagent加入0.2ml 氯仿,蓋緊蓋子。渦旋混勻或用手劇烈晃動15s,室溫孵育2~3min。

3.5 于12,000g 4℃離心15min。離心后混合物分為三層:下層酚-氯仿層,中間層,和上層無色的水相層。RNA無一例外的停留在水相層中。水相層的容量約為所加TRIzol Reagent體積的60%。用槍吸取上層無色水相到一新的離心管中,避免吸到任何中間層或下層成分。

【注意】:如果希望分離DNA和蛋白,請保留中間層和有機層。

 

4.      RNA分離

4.1    RNA的沉淀:a)【可選】如果起始樣本量比較少(<106個細胞或<10mg組織),加入5-10μg RNase-free的糖原作為核酸助沉劑到水相中。b)按每ml起初TRIzol Reagent加入0.5ml異丙醇,顛倒數次混勻,室溫沉淀10min。如果希望提取microRNA等小RNA,推薦-70℃沉淀過夜。c)于12,000g 4℃離心10min,在管底可見RNA沉淀,棄上清。



4.2    RNA的清洗:a)按每ml起初TRIzol Reagent加入1ml 75%乙醇重懸沉淀?!咀ⅲ篟NA在75%乙醇中-20℃至少保存1年,4℃至少1周】;b)低速漩渦或顛倒混勻,于7,500g 4℃離心5min,棄上清。再用離心機甩一下(>5,000rpm, 離心1秒),小心吸盡液體。c)操作的最后,簡單干燥RNA沉淀(空氣干燥或真空干燥5~10min)。不要在真空管里離心干燥RNA。尤為重要的是,不能讓RNA沉淀完全干燥,否則會極大的降低其可溶性。部分溶解的RNA樣本的A260/A280比值<1.6。

4.3    RNA的溶解:用20~50μl 無RNases水或含0.5% SDS的無RNases水溶解RNA,用槍上下吹打2~3次,使其充分溶解,置于-70℃保存或直接用于后續實驗,如果后續要做酶切反應請勿用SDS。

【注意】:對于肝臟、胰腺、腎臟等RNase含量較高的組織,沉淀可用100%去離子甲酰胺(貨號:MS5515-50ML)溶解。

 

5.      RNA產量的測定

5.1    用無RNase水稀釋RNA,之后測定在260nm和280nm的吸收值。

5.2    使用公式A260×稀釋倍數×40= μg RNA/ml。

5.3    計算A260/A280比值,比值在1.8~2.0之間視為純度較高,濃度>4 μg/ml的樣品適用于分光光度計測定。

5.4    進行甲醛變性瓊脂糖電泳,確定RNA的完整性和污染情況。


相關產品

貨號

名稱

規格            

MF0403-100ML     

TRIzol Reagent總RNA抽提試劑

100ml

MF0404-500ML

DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(無DNase、RNase )   

500ml

MF0406-100ML

Surface RNase Remover固相RNase清除劑

100ml

MF0407-1.5ML

Solution RNase Remover液相RNase清除劑

1.5ml

MF0409-50ML

RNATector Stabilization Solution RNA穩定保存液

50ml

MF0410-100ML

RNATector-ICE Frozen Tissue Transition Solution冰凍組織RNA穩定液

100ml

MF0412-1G

Glycogen (5mg/ml)核酸助沉劑糖原(5mg/ml)

1ml

MF0413-500UL

Glycogen (20mg/ml)核酸助沉劑糖原(20mg/ml)

500μl

MF0416-100ML

DNase/RNase-Free Water

100ml

MS5515-50ML

Formamide Deionized去離子甲酰胺

50ml


附錄1 常見問題與解決方案

出現問題

可能起因

解決方案

比預期產量低

樣本未充分勻漿或裂解

降低起始樣本量;剪切組織到更小塊,確保組織完全浸泡到TRIzol Reagent以達到完全裂解。

沉淀未完全溶解

通過反復用槍吸取樣品和在50~60℃加熱樣品的方式來增加溶解率

樣本被降解

樣本未及時處理或收集后未馬上凍存

樣本必須在收集后馬上處理或立即凍存

溶液或使用管子未經RNase去除處理

確保實驗中所用到的耗材和溶液不受RNase污染

樣本制備物沒有保存在適當溫度下

將RNA樣本保存在-70℃。

DNA污染

吸取水相層時帶入中間/有機相層

不要嘗試吸取離心分層后的所有水相層

RNA A260/A280低

在不足量的TRIzol Reagent內勻漿樣品,RNA與蛋白質、DNA未完全分離

加入足量的TRIzol Reagent到樣本

勻漿后樣品未在室溫放置5min,RNA與核蛋白未完全解離

勻漿后樣品需室溫放置5min

水相中混有有機相,帶有蛋白質和DNA的污染

不要嘗試吸取離心分層后的所有水相層

抽提得到的RNA沉淀未完全溶解

RNA需要完全溶解

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。


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