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Zymo Research Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™ 酵母轉化試劑盒
時間:2017-08-25     作者:懋康原創     文章來源:懋康生物    

【溫馨提示】:

見我司懋康生物整理的酵母雙雜交檢測(Yeast two-hybrid assay)產品專題。

 

基本描述

Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?(酵母轉化試劑盒)是一款專門設計用于酵母轉化和文庫篩選的試劑盒,比目前商業或公開的文獻方法更快捷和更有效。本試劑盒制備的酵母細胞可立即用于轉化或凍存待用(≤ -70°C)。本試劑盒制備的細胞適用于環形和線性DNAs轉化,同時也能用于其他真菌包括C. albicans,S. pombe和P. pastoris的轉化。

 

產品亮點:

~ 高轉化效率:每μg質粒DNA(環形)可產生105- 106個酵母轉化子;

~ 制備好的感受態細胞可凍存后待用;

~ 快速簡單步驟于10min內可制備酵母感受態細胞;

~ 簡單單一步驟,1h內完成轉化;

~ 適用菌株類型廣(S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris);

~ 簡單方法用于多質粒轉化;

 

產品組分:試劑盒可做120個常規轉化或600個微量轉化實驗。試劑盒4℃一年有效。

組分                          

規格                   

保存                   

EZ1 Solution

60ml

0-4℃

EZ2 Solution

6ml

0-4℃

EZ3 Solution

60ml

0-4℃

 

操作流程【見下圖】:

A. 感受態細胞制備

30℃,于10ml YPD肉湯培養酵母菌直至中數量級(~5 x 106-2 x107cells/ml或OD600= 0.8-1.0)。以下步驟室溫進行。

A1,500 x g離心細胞4min,吸掉上清液;

A2,加入10ml EZ1溶液清洗沉淀。重新離心沉淀細胞,吸掉上清液;

A3,加入1ml EZ2溶液重懸沉淀細胞。

此時獲得的感受態細胞即可直接用于轉化或凍存備用(≤ -70°C)。注意需緩慢凍存細胞,不可使用液氮瞬間凍存細胞。


B. 轉化

以下步驟適用于新鮮制備和凍存(室溫融化)的酵母感受態細胞。

B1,取50μl感受態細胞與0.2-1μg DNA(體積少于5μl)混合;加入500μl EZ3溶液,完全混合;

B2,30°C孵育45min,孵育過程中用手指輕彈或低速渦旋(如果適用于轉化DNA)2-3次讓其混勻;

B3,從上面轉化混合液中取50-150μl到適當平板上,沒有必要沉淀或清洗細胞。、

B4,30°C孵育平板2-4天使得轉化子生長。

 

訂購信息:Zymo Research原裝正品,現貨供應。歡迎來電咨詢,021-54736159,QQ:2971634497。

貨號       

產品名稱

規格                

價格(元)     

T2001

Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?(酵母轉化試劑盒)   

120 Rxns

咨詢

T2001 Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? User Manual


常見問題(FAQs):

1. 試劑盒內含什么及工作原理?

答復:試劑盒所用步驟是特別設計,某些步驟,類似于基于鋰陽離子的方法,不需要原生質體制備。作用機制可能涉及一些代謝通路,但并未完全清晰。

2. 試劑盒是否適用于C. albicans,S. pombe,或Pichia pastoris?

答復:根據Zymo實驗室內部數據,適合以上菌株感受態細胞制備和轉化。

3. 感受態細胞≤ -70°C能存放多久?感受態細胞的融化方法?

答復:感受態細胞≤ -70°C保存半年轉化效率不會有損失,超過半年效率開始逐漸降低。

4. 感受態細胞的反復凍融會影響轉化效率?

答復:室溫融化。

5. 限制性內切酶處理的質粒是否不經純化就能直接轉化?

答復:是的。不同的內切酶消化緩沖液對轉化效率影響微弱。每個轉化實驗將DNA體積調整到5μl。

6. 是否需要使用含山梨醇的平板?

答復:不需要。任何平板都適合本轉化實驗。

7. 是否添加載體DNA?

答復:不需要添加載體DNA。


引用文獻(Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?):

Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species.

Curran KA, et. al. (2014) Design of synthetic yeast promoters via tuning of nucleosome architecture. Nat Commun. 5:4002.

The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength.

Nevoigt, E., et al. (2006) Engineering of promoter replacement cassettes for fine-tuning of gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Appl Environ Microb, 72(8): 5266-5273.

 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。



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